Nowatorska kanceropatia w nadciśnieniu tętniczym płuc AD 6

Konsekwencje funkcjonalne mutacji hKCNK3. Do pomiaru prądów wyrażonych i ich odpowiedzi na pH i czynniki farmakologiczne stosowano procedury całkowitego sklejania z użyciem pełnej komórki. Panel A pokazuje reprezentatywną zależność pH prądu w nieutrwalonym (NM) kanale hKCNK3. Linie przerywane wskazują gęstość prądu przy pH 7,4. Dla każdego punktu badano 4 do 14 komórek. Pełna krzywa pokazuje najlepsze dopasowanie wartości odpowiedzi na dawkę. Prądy zmierzono przy +60 mV i znormalizowano do prądu zmierzonego przy pH 10,4. Panel B pokazuje bieżące ślady przy pH 7,4 dla niezmutowanego kanału hKCNK3 i mutantów T8K, G97R, E182K, Y192C, G203D i V221. Gęstość prądu mierzona jest jako pikobar na pikofarad (pA / pF). Dla wszystkich bieżących śladów skala pionowa wynosi 10 pA / pF, a skala pozioma to 20 mV. Wstawka pokazuje protokół rampy (tj. Stopnie napięciowe lub rampy). Pionowe linie przerywane przedstawiają prąd o wartości 60 mV. Panel C pokazuje podsumowanie wyników przedstawionych w panelu B, zgodnie z mutacją. Panel D pokazuje porównanie homozygotycznego niezmutowanego kanału hKCNK3 i heterozygotycznych kanałów zawierających mutanta Y192C, G203D lub V221L przy pH 7,4. Dla każdego punktu badano 7 do 25 komórek. W panelach C i D dane przedstawiono jako średnie; T bary oznaczają błędy standardowe. Gwiazdki oznaczają P <0,05 dla porównania między niezmutowanym kanałem hKCNK3 i każdym mutantem. Aby zbadać konsekwencje wariantów KCNK3, badaliśmy wpływ sześciu mutacji odkrytych w naszych badaniach genetycznych kanału hKCNK3. Wszystkie niezmutowane kanały i wszystkie zmutowane kanały testowano pod kątem wrażliwości na pH w celu potwierdzenia ich tożsamości jako kanałów hKCNK3. Zależność pH nieutrwalych kanałów hKCNK3 pokazano na Figurze 3A. Wszystkie badane mutanty spowodowały utratę funkcji przy fizjologicznym pH (7,4), gdy ulegają ekspresji w monoterapii, stan, który symuluje homozygotyczną ekspresję u ludzi (Figura 3B i 3C). Jednakże, ponieważ kanały potasowe z dwiema porami zło.one jako dimery 16 i pacjenci niosący mutacje są heterozygotami, to tak.e współeksprymuje się nie zmutowany i zmutowany cDNA kanału hKCNK3 w celu symulacji ekspresji u pacjentów heterozygotycznych. W przypadku tych eksperymentów wybraliśmy trzy mutacje zlokalizowane w różnych regionach kanału i odkryliśmy, że badane mutacje (Y192C, G203D i V221L) zmniejszały gęstość prądu, gdy koeksprymowano je z nieumotywnymi kanałami, w porównaniu z ekspresją nieumotywujących tylko kanałów hKCNK3 (rysunek 3D ).
Rysunek 4. Rysunek 4. Farmakologiczne odzyskiwanie zmutowanych kanałów hKCNK3. Wykazano, że inhibitor fosfolipazy A2 ONO-RS-082 aktywuje nieutrwalone (NM) kanały hKCNK3. Panel A pokazuje reprezentatywne nagrania przed zastosowaniem ONO-RS-082 (szare linie) i po aplikacji (czarne linie) w nie zmutowanych i zmutowanych kanałach hKCNK3
[patrz też: cyklopiroksolamina, osteopatia Warszawa, wzorcowanie termometrow ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: cyklopiroksolamina osteopatia Warszawa wzorcowanie termometrow