Nowatorska kanceropatia w nadciśnieniu tętniczym płuc AD 3

Badanie zostało sfinansowane przez National Institutes of Health, a protokół został zatwierdzony przez odpowiednie komisje ds. Ludzkich. Szczegółowe informacje na temat metod znajdują się w dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie. DNA członków rodziny zostało wcześniej zsekwencjonowane, aby ustalić, że nie są one nosicielami mutacji BMPR2, ALK1, ENG, SMAD9 lub CAV1. Wykorzystaliśmy sekwencjonowanie całego eksonu do porównania trzech dotkniętych członków rodziny, przyjmując autosomalny dominujący tryb dziedziczenia, a warianty filtrowano na podstawie częstotliwości alleli w kontrolach i przewidywanej patogenności. Nowatorski wariant został zidentyfikowany w KCNK3 (gen kodujący podrodzinę kanału potasowego pod podrodzinę K, element 3), a sekwencjonowanie Sanger KCNK3 przeprowadzono na próbkach otrzymanych od wszystkich dostępnych członków rodziny badanej w celu oceny dla kosegregacji z chorobą. Aby zidentyfikować dodatkowe mutacje i nośniki mutacji, próbki DNA od 82 niespokrewnionych pacjentów z rodzinnym tętniczym nadciśnieniem płucnym i 230 pacjentów z idiopatycznym tętniczym nadciśnieniem płucnym zsekwencjonowano, a dane dotyczące sekwencjonowania całego egzoszkieletu od 10 dodatkowych pacjentów z rodzinnym tętniczym nadciśnieniem płucnym poddano przeglądowi w celu replikacji. odkrycia w początkowej rodzinie i określenie częstotliwości mutacji w KCNK3 u pacjentów z rodzinnym i idiopatycznym tętniczym nadciśnieniem płucnym. W przypadku pacjentów z rodzinnym tętniczym nadciśnieniem płucnym, u których stwierdzono mutacje KCNK3, przetestowano innych dostępnych członków rodziny w celu oceny segregacji w obrębie rodziny.
Próbkowanie tkanki płucnej
Tkanki płuc pobrano z eksplantowanych płuc dwóch pacjentów z idiopatycznym tętniczym nadciśnieniem płucnym. Próbki utrwalano w 10% formalinie, przetwarzano, zatapiano w parafinie, dzielono i barwiono hematoksyliną i eozyną, CD31, alfa-aktyną mięśni gładkich lub czynnikiem von Willebranda, wraz z elastyczną plamą Verhoeffa-van Giesona.
Ekspresja i analiza funkcjonalna ludzkiego kanału KCNK3
Przeprowadziliśmy analizę funkcjonalną ludzkiego kanału KCNK3 (hKCNK3) w celu oceny zidentyfikowanych wariantów genetycznych. Mutacje zostały wprowadzone do komplementarnego DNA (cDNA) hKCNK3 i ulegają ekspresji przy użyciu przejściowej transfekcji w komórkach COS-7. Do pomiaru prądów wyrażonych i ich odpowiedzi na pH i czynniki farmakologiczne stosowano procedury całkowitego sklejania z użyciem pełnej komórki. Szczegółowe metody badań biologicznych molekularnych i elektrofizjologicznych podano w Dodatku Uzupełniającym.
Wyniki
Sekwencjonowanie całego egzamu
Średnia głębokość pokrywania sekwencji danych sekwencjonowania całego egzonu wynosiła 78,7 ×, przy 87,5% regionu docelowego dla wychwytu egzomu mającego zasięg większy niż 20x.
[hasła pokrewne: żuraw warsztatowy, osteopatia Warszawa, wzorcowanie przyrządów pomiarowych ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: osteopatia Warszawa wzorcowanie przyrządów pomiarowych żuraw warsztatowy